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ActinRed 555（細胞骨架紅色熒光探針）

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names：
ActinRed 555 ReadyProbes
CAS號：

MDL Number：
MF(分子式)： C60H70N12O13S2 MW(分子量)： 1231.4
EINECS: Reaxys Number:
Pubchem ID: Brand:BIOFOUNT

ActinRed 555 Probes(細胞骨架紅色熒光探針)一種高親和的 F-肌動蛋白探針由Flour 熒光染料與鬼筆環(huán)肽偶聯(lián)而成。這些熒光標記的鬼筆環(huán)肽對于不同物種（包括動植物）的細胞骨架肌動蛋白具有相同的結合特性。此外，這些鬼筆環(huán)肽偶聯(lián)物對 F-肌動蛋白具有高親和性和高選擇性，廣泛用于多色成像研究領域。最大激發(fā)/發(fā)射波長（Ex/Em）: 540～546/565～575nm。

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中文別名	ActinRed 555（細胞骨架紅色熒光探針）
英文別名	ActinRed 555 ReadyProbes
CAS號
Inchi
InchiKey
分子式 Formula	C60H70N12O13S2
分子量 Molecular Weight	1231.4
溶解度Solubility
性狀	Solid power
儲藏條件 Storage conditions	冰袋運輸。-20℃避光干燥保存， 1年有效。

ActinRed 555 Probes 實驗準備材料：
1. （可選）甲醇
2. 1×PBS 緩沖液, pH 7.4, 細胞培養(yǎng)級別（貨號：HC0016）
3. 固定液 4%多聚甲醛（溶于 PBS 緩沖液）
4. 丙酮或透化液 0.5% Triton X-100（溶于 PBS 緩沖液）
5. Fluoromount-GTM 水溶性封片劑（不含 DAPI），DAPI（貨號：SC0382）
6. 可選）DAPI Fluoromount-GTM 水溶性封片劑（含 DAPI）
7. （可選）BSA，標準級別（貨號：SS2164）
8. 載玻片和蓋玻片
9. 蓋玻片周圍密封液（如透明指甲油）
10. 組裝有 TRITC 激發(fā)/發(fā)射濾片，以及 DAPI 激發(fā)/發(fā)射濾片的熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡。

ActinRed 555 ReadyProbes 工作液制備

1. ActinRed 555 Probes（300T）
本品以溶于甲醇的 20µM 儲存液形式提供，總量為 300µL。按照 100 nM 的工作液濃度來換算，可制備總量為 60 mL 的工作液。建議收到產(chǎn)品后，根據(jù)單次使用量，對母液進行小量分裝，-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。
開始實驗前，使用 1×PBS 緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為：80~200nM。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

2. ActinRed 555 Probes（1mg）

本品以凍干粉形式提供，分子量為 1231.4，總量為 1mg。可先用甲醇或者 DMSO 充分溶解配制成 20~100µM 的儲存液。如，加入 8.1208mL 甲醇到 1mg 該品即得到 100µM 等量的儲存液，根據(jù)單次使用量，進行小量分裝，-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。
開始實驗前，使用 1×PBS 緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為：80~200nM。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用

ActinRed 555 ReadyProbes 染色方法：
注意：對于某些特定的實驗體系，我們提供的染色方案可能需要優(yōu)化。但在大多數(shù)情況下，按照本操作說明可取得一致的結果。
以下方法以細胞爬片的染色步驟為例：
1. 用 PBS（pH7.4）輕輕洗滌細胞爬片。
2. 用 3.7%的多聚甲醛（PBS 配制）室溫固定細胞，時間為 10 分鐘。
注意：甲醇在固定過程中可能會破壞細胞肌動蛋白，因此**避免任何含甲醇的固定劑。首選的固定劑是不含甲醇的多聚甲醛溶液。
3. 用 PBS 清洗細胞樣品兩遍或以上。
4. 將細胞爬片至于干凈的玻璃培養(yǎng)皿中，用含 0.1% Triton X-100 的 PBS 緩沖液室溫透化樣本，處理時間 3-5 分鐘。（也可使用丙酮溶液透化處理，但需至于-20℃）
5. 用 PBS 清洗細胞樣品兩遍或以上。
6. 用含 1% BSA 的 PBS 封閉細胞，時間為 20-30 分鐘。
7. 向細胞爬片上滴加兩滴 ActinRed 555 Probes，室溫避光孵育 30 分鐘。為避免染料蒸發(fā)，請將爬片置于密閉的濕盒中。
8. 用 PBS 清洗細胞樣品兩遍或以上。
9. 如需長期保存，請將細胞樣品至于空氣中自然晾干，并用封片劑封片。儲存于 2-6℃避光環(huán)境下的樣品正常可至少保存半年。

BPAE cells were fixed and permeabilized using the Image-iT Fixation/Permeabilization Kit. Actin was stained using ActinRed™ 555 ReadyProbes® reagent and nuclei were stained with NucBlue Fixed.