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Cal-520 AM鈣離子熒光探針【CAS 】
NMR COA MSDS - Names：
Cal-520 AM
- CAS號：
MDL Number： - MF(分子式)： MW(分子量)： 1102.95
- EINECS: Reaxys Number:
- Pubchem ID: Brand:BIOFOUNT
Cal-520 AM是新型的鈣離子熒光探針,Cal-520在探測細胞內鈣離子方面提供了一個卓越的熒光分析工具。 Cal-520 AM是新型的鈣離子熒光染料相比現在還在應用的綠色鈣離子熒光指示劑(例如 Fluo-3 AM 和 Fluo-4 AM)在信噪比和細胞內滯留方面有著顯著的改進。
| 貨品編碼 | 規格 | 純度 | 價格 (￥) | 現價(￥) | 特價(￥) | 庫存描述 | 數量 | 總計 (￥) |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| HCQ000597-1mg | 1mg | 97% | ￥ 4600.00 | ￥ 4600.00 | 1-3days | ￥ 0.00 |
| 中文別名 | Cal-520 AM鈣離子熒光探針;Cal-520 AM;鈣離子熒光探針;Cal-520 AM;Cal-520/AM;Cal 520/AM;Cal 520 AM;Cal520-AM;Cal-520, AM |
| 英文別名 | Cal-520 AM |
| CAS號 | |
| Inchi | |
| InchiKey | |
| 分子式 Formula | |
| 分子量 Molecular Weight | 1102.95 |
| 溶解度Solubility | Soluble in DMSO |
| 性狀 | 粉末 |
| 儲藏條件 Storage conditions | -20℃ |
Cal-520 AM鈣離子熒光探針使用方法推薦:
1. 帶有 Cal-520®,AM 的稱重傳感器：
AM 酯是非極性酯，可以很容易地穿過活細胞膜，并被活細胞內的細胞酯酶迅速水解。 AM 酯廣泛用于將各種極性熒光探針無創地加載到活細胞中。但是，使用 AM 酯時必須小心，因為它們容易水解，尤其是在溶液中。它們應在使用高質量無水二甲基亞砜 (DMSO) 前重新配制。 DMSO 儲備溶液可在 –20 °C 下干燥保存并避光。在這些條件下，AM 酯應能穩定數月。以下是我們推薦的將 Cal-520® AM、Cal-590™ AM 或 Cal-630™ AM 酯裝入活細胞的方案。本協議僅提供指導方針，應根據您的具體需求進行修改。
a) 在高質量無水 DMSO 中制備 2 至 5 mM Cal-520® AM 儲備溶液。
b) 在實驗當天，將 Cal-520® AM 溶解在 DMSO 中或將等分的指示劑儲備溶液解凍至室溫。在 Hanks and Hepes 緩沖液 (HHBS) 或您選擇的含有 0.04% Pluronic® F-127 的緩沖液中制備 10 到 20 µM 的染料工作溶液。細胞加載所需的指示劑的確切濃度必須憑經驗確定。
注意：非離子洗滌劑 Pluronic® F-127 有時用于增加 Cal-520® AM 的水溶性。
c) 如果您的細胞（例如 CHO 細胞）含有有機陰離子轉運體，則可以將丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（最終孔濃度為 0.5-1 mM）以減少染料泄漏脫酯指示劑。
d) 將等體積的染料工作溶液（來自步驟 b 或 c）添加到您的細胞板中。
e) 將染料加載板在細胞培養箱中孵育 60 至 90 分鐘，然后在室溫下再孵育 30 分鐘。
注意：孵育染料超過 2 小時可為某些細胞系提供更好的信號強度。
f) 用 HHBS 或您選擇的包含陰離子轉運蛋白抑制劑（例如 1 mM 丙磺舒）的緩沖液替換染料工作溶液，以去除多余的探針。
g) 在 Ex/Em = 490/525 nm（對于 Cal-520® AM）、540/590 nm 下運行實驗
2. 測量細胞內鈣反應：
圖 1. 沒有丙磺舒的 CHO-M1 細胞中內源性 P2Y 受體對 ATP 的反應。 CHO-M1 細胞以每孔 40,000 個細胞每孔 40,000 個細胞接種在 96 孔黑壁/透明底部肋板中過夜。 將 100 µl 4 µM Fluo-3 AM、Fluo-4 AM 或 Cal 520® AM 的 HHBS 溶液加入孔中，并將細胞在 37 °C 下孵育 2 小時。 將染料加載介質替換為 100 µl HHBS，加入 50 µl 300 µM ATP，然后使用 FITC 通道在熒光顯微鏡（Olympus IX71）上成像。
圖 2. 使用 Cal-520® 或 Fluo-4 AM 測量的 CHO-K1 細胞中內源性 P2Y 受體的 ATP 刺激鈣反應。 CHO-K1 細胞以每孔 50,000 個細胞每孔 50,000 個細胞的形式接種在 96 孔黑壁/透明底部肋板中過夜。 將 100 µL 5 µM Fluo-4 AM 或 Cal-520® AM（含（A）或不含（B）2.5 mM 丙磺舒）加入細胞中，并將細胞在 37oC 下培養 2 小時。 由 FlexStation（Molecular Devices）添加 ATP（50 µL/孔）以達到最終指示濃度。
圖 3. CHO-K 細胞中內源性 P2Y 受體對 ATP 的反應。 CHO-K 細胞以每孔 40,000 個細胞每孔 40,000 個細胞接種在 96 孔黑壁/透明底部肋板中過夜。 將 100 µl 含 1 mM 丙磺舒的 HHBS 中的 4 µM Cal 590™ AM 或 Cal 630™ AM 加入孔中，并將細胞在 37 °C 下孵育 2 小時。 用 100 µl HHBS 和 1 mM 丙磺舒替換染料加載培養基，然后在加入 50 µl 300 µM ATP 之前和之后使用 TRITC 通道在熒光顯微鏡（Olympus IX71）上成像。
1. 帶有 Cal-520®,AM 的稱重傳感器：
AM 酯是非極性酯，可以很容易地穿過活細胞膜，并被活細胞內的細胞酯酶迅速水解。 AM 酯廣泛用于將各種極性熒光探針無創地加載到活細胞中。但是，使用 AM 酯時必須小心，因為它們容易水解，尤其是在溶液中。它們應在使用高質量無水二甲基亞砜 (DMSO) 前重新配制。 DMSO 儲備溶液可在 –20 °C 下干燥保存并避光。在這些條件下，AM 酯應能穩定數月。以下是我們推薦的將 Cal-520® AM、Cal-590™ AM 或 Cal-630™ AM 酯裝入活細胞的方案。本協議僅提供指導方針，應根據您的具體需求進行修改。
a) 在高質量無水 DMSO 中制備 2 至 5 mM Cal-520® AM 儲備溶液。
b) 在實驗當天，將 Cal-520® AM 溶解在 DMSO 中或將等分的指示劑儲備溶液解凍至室溫。在 Hanks and Hepes 緩沖液 (HHBS) 或您選擇的含有 0.04% Pluronic® F-127 的緩沖液中制備 10 到 20 µM 的染料工作溶液。細胞加載所需的指示劑的確切濃度必須憑經驗確定。
注意：非離子洗滌劑 Pluronic® F-127 有時用于增加 Cal-520® AM 的水溶性。
c) 如果您的細胞（例如 CHO 細胞）含有有機陰離子轉運體，則可以將丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（最終孔濃度為 0.5-1 mM）以減少染料泄漏脫酯指示劑。
d) 將等體積的染料工作溶液（來自步驟 b 或 c）添加到您的細胞板中。
e) 將染料加載板在細胞培養箱中孵育 60 至 90 分鐘，然后在室溫下再孵育 30 分鐘。
注意：孵育染料超過 2 小時可為某些細胞系提供更好的信號強度。
f) 用 HHBS 或您選擇的包含陰離子轉運蛋白抑制劑（例如 1 mM 丙磺舒）的緩沖液替換染料工作溶液，以去除多余的探針。
g) 在 Ex/Em = 490/525 nm（對于 Cal-520® AM）、540/590 nm 下運行實驗
2. 測量細胞內鈣反應：
圖 1. 沒有丙磺舒的 CHO-M1 細胞中內源性 P2Y 受體對 ATP 的反應。 CHO-M1 細胞以每孔 40,000 個細胞每孔 40,000 個細胞接種在 96 孔黑壁/透明底部肋板中過夜。 將 100 µl 4 µM Fluo-3 AM、Fluo-4 AM 或 Cal 520® AM 的 HHBS 溶液加入孔中，并將細胞在 37 °C 下孵育 2 小時。 將染料加載介質替換為 100 µl HHBS，加入 50 µl 300 µM ATP，然后使用 FITC 通道在熒光顯微鏡（Olympus IX71）上成像。
圖 2. 使用 Cal-520® 或 Fluo-4 AM 測量的 CHO-K1 細胞中內源性 P2Y 受體的 ATP 刺激鈣反應。 CHO-K1 細胞以每孔 50,000 個細胞每孔 50,000 個細胞的形式接種在 96 孔黑壁/透明底部肋板中過夜。 將 100 µL 5 µM Fluo-4 AM 或 Cal-520® AM（含（A）或不含（B）2.5 mM 丙磺舒）加入細胞中，并將細胞在 37oC 下培養 2 小時。 由 FlexStation（Molecular Devices）添加 ATP（50 µL/孔）以達到最終指示濃度。
圖 3. CHO-K 細胞中內源性 P2Y 受體對 ATP 的反應。 CHO-K 細胞以每孔 40,000 個細胞每孔 40,000 個細胞接種在 96 孔黑壁/透明底部肋板中過夜。 將 100 µl 含 1 mM 丙磺舒的 HHBS 中的 4 µM Cal 590™ AM 或 Cal 630™ AM 加入孔中，并將細胞在 37 °C 下孵育 2 小時。 用 100 µl HHBS 和 1 mM 丙磺舒替換染料加載培養基，然后在加入 50 µl 300 µM ATP 之前和之后使用 TRITC 通道在熒光顯微鏡（Olympus IX71）上成像。
| 產品說明 | Cal-520 AM是新型的鈣離子熒光染料,Cal-520在探測細胞內鈣離子方面提供了一個卓越的熒光分析工具。 Cal-520 AM是新型的鈣離子熒光染料相比現在還在應用的綠色鈣離子熒光指示劑(例如 Fluo-3 AM 和 Fluo-4 AM)在信噪比和細胞內滯留方面有著顯著的改進。 |
| Introduction | |
| Application1 | |
| Application2 | |
| Application3 |
Cal-520在探測細胞內鈣離子方面提供了一個卓越的熒光分析工具。 Cal-520 AM是新型的鈣離子熒光染料相比現在還在應用的綠色鈣離子熒光指示劑(例如 Fluo-3 AM 和 Fluo-4 AM)在信噪比和細胞內滯留方面有著顯著的改進。G蛋白偶聯受體或者.鈣離子通道可以被Cal-520 AM通過細胞膜標記鈣離子而預先加載。Cal-520 AM一旦進入細胞內，其親脂基團就會被剪切酶水解成一個帶陰性負離子的熒光染料被阻斷在細胞內。它與鈣離子結合其熒光就會顯著的增強。當細胞內的細胞器受到刺激就會釋放出鈣離子， Cal-520的熒光信號就會顯著的增加。長波長、高靈敏性、大于100倍的熒光信號增強使得Cal-520 AM成為一個理想的細胞內鈣離子測量指示器。高的信噪比和極好的細胞內滯留使得Cal-520在測評 GPCR 和鈣離子通道目標及他們的受體激動劑和拮抗劑的篩選方面相比其他鈣離子探針顯現更加卓越的優越性。相比其他 Cal-520指示器 Cal-520FF™具有最小的鈣離子親和力他用以標記 Kd ~ 10 uM單位的鈣離子。
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