熒光顯微鏡的一個基本原理是在熒光劑的幫助下對細胞成分進行高度特異性的可視化。這可以是一種熒光蛋白——例如 GFP——在基因上與感興趣的蛋白質相關聯。如果克隆是不可能的——例如在組織學樣本中——使用免疫熒光染色等技術來可視化感興趣的蛋白質。為此，使用了與不同熒光染料連接并直接或間接與適當目標結構結合的抗體。在熒光染料的幫助下，熒光顯微鏡不僅限于蛋白質，還可用于檢測核酸、聚糖和其他結構。甚至可以使用特定應用的各種活細胞染料，這些染料允許使用細胞器選擇性染色（例如 ER、線粒體、高爾基體）或功能測定（例如，例如活細胞追蹤、標記、細胞增殖或活死細胞測定，其中熒光是讀出方式。甚至可以檢測到鈣離子等非生物物質。本文介紹了常用的熒光劑。

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免疫熒光
在熒光顯微鏡中，有兩種方法可以顯示您感興趣的蛋白質。要么借助內在熒光信號——通過將熒光蛋白與靶蛋白進行基因連接——要么借助與目標蛋白特異性結合的熒光標記抗體。對于一些生物學問題，執行后一個問題更有用甚至是必要的。例如，在組織學樣本的情況下，不可能使用熒光蛋白，因為通常樣本來自不含有任何熒光蛋白的生物體。此外，如果有功能性抗體可用，免疫熒光比熒光蛋白技術快得多，在熒光蛋白技術中，您必須克隆感興趣的基因并將 DNA 轉染到足夠的細胞中。熒光蛋白的另一個缺點在于它們本身就是蛋白質的性質。有了它，它們在細胞內具有特定的蛋白質特征，這可能導致功能障礙或對所附著的感興趣蛋白質的誤解。然而，應該考慮使用熒光蛋白通常是研究活細胞的首選方法。
免疫熒光利用抗體對其抗原的非常特異性的結合親和力。這可以有兩種不同的外觀。最簡單的方法是使用一種與感興趣的蛋白質結合的熒光標記抗體。這稱為直接免疫熒光。
在大多數情況下，使用兩種形式的抗體。第一個與目標蛋白結合，本身沒有熒光標記（一抗）。但是與一抗結合的第二種抗體（二抗）特異性地攜帶熒光染料。這種方法稱為間接免疫熒光，具有幾個優點。一方面存在放大效應，因為不止一種二抗與一種一抗結合。另一方面，通常比用普通熒光染料標記的特異性一抗更容易找到二抗。下面，我們回顧一下最常用的熒光染料。

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FITC 和 TRITC
異硫氰酸熒光素 (FITC) 是一種有機熒光染料，可能是免疫熒光和流式細胞術中最常用的染料之一。 它在 495/517 nm 處有一個激發/發射峰，并且可以借助其與蛋白質上的氨基、巰基、咪唑基、酪氨酰基或羰基結合的反應性異硫氰酸酯基團與不同的抗體偶聯。 FITC（是最早用于熒光顯微術的染料之一，也是 Alexa Fluor®488 等其他熒光染料的前體。它的熒光活性是由于其大的共軛芳族電子系統，可被藍色光激發 光譜。

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1.果蠅胚胎發育，綠色：FITC，紅色：TRITC。
一種經常與 FITC 結合使用的染料是 TRITC（四甲基羅丹明-5-（和 6）-異硫氰酸酯）。 與 FITC 不同，TRITC 不是熒光素，而是羅丹明家族的衍生物。 羅丹明也有一個大的共軛芳香電子系統，這導致了它們的熒光行為。 TRITC 被綠色光譜中的光激發，最大波長為 550 nm。 其發射最大值位于 573 nm。 與蛋白質（例如抗體）的結合也基于反應性異硫氰酸酯基團。
盡管 FITC 和 TRITC 仍被廣泛使用，但它們是相當弱的熒光染料，不推薦用于最先進的顯微鏡檢查。

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花青染料
Alexa Fluor® 染料是一大類帶負電荷的親水性熒光染料，常用于熒光顯微術。 所有 Alexa Fluor® 染料都是不同堿性熒光物質的磺化形式，如熒光素、香豆素、花青或羅丹明（例如 Alexa Fluor®546、Alexa Fluor®633）。 在它們的標簽中提到了各自的激光激發波長。 例如，最常用的染料之一 Alexa Fluor®488 的最大激發波長為 493 nm，允許使用標準 488 nm 激光進行激發，而 Alexa Fluor®488 的最大發射波長為 519 nm，它是一種熒光素衍生物和 具有與 FITC 相似的特性。 然而，它顯示出更好的穩定性、亮度和更低的 pH 敏感性。

2. 小鼠轉基因胚胎，中間體，E10.5小鼠轉基因胚胎的五個中間體：EpaxisMyf5 eGFP； 對 GFP-Alexa 488 進行免疫染色； 胚胎肌纖維用 Desmin-Cy3 染色，細胞核從上到下顯示為 Hoechst 尺寸：3.5 mm (a), 800 µm (b)。 禮貌：Aurélie Jory, Cellules Souches et Développement, Institut Pasteur, Paris, France 和 IGBMC, IGBMC 影像中心

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3.小鼠成纖維細胞，綠色：F-Actin，FITC，紅色：Tubulin，Cy5，藍色：Nuclei，DAPI。

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DNA染色
您可能想使用熒光顯微鏡研究核酸。例如，通過檢測細胞核來定義細胞的確切位置或數量。最常見的 DNA 染色劑之一是 DAPI（4',6-diamidino-2-phenylindole），它與 DNA 雙螺旋的富含 A-T 的區域結合。與未結合狀態相比，如果連接到 DNA 上，DAPI 熒光強度會增加。它被最大波長為 358 nm 的紫外光激發。發射光譜很寬，峰值在 461 nm。對于 RNA 結合，也可以檢測到微弱的熒光。在這種情況下，發射移至 500 nm。有趣的是，DAPI 能夠滲透完整的質膜，使其對固定細胞和活細胞有用。
第二種廣泛使用的 DNA 染色選項是 Hoechst 染料系列。 Hoechst 33258、Hoechst 33342 和 Hoechst 34580 是具有向 A-T 富集區域插入趨勢的雙苯并亞胺。與 DAPI 類似，它們被紫外光激發并在 455 nm 處具有最大發射，在未結合條件下移動到 510–540 nm。 Hoechst 染料還具有細胞滲透性，因此可用于固定細胞和活細胞。它們的毒性低于 DAPI。
不透膜的 DNA 染色劑是碘化丙啶，通常用于區分細胞培養物中的活細胞和死細胞，因為它不能進入??完整細胞。碘化丙啶也是一種嵌入劑，但對不同的堿基沒有結合偏好。在核酸結合狀態下，其最大激發波長為 538 nm。最高發射波長為 617 nm。未結合的碘化丙啶激發和發射最大值移動到較低的波長和較低的強度。它還可以在不改變其熒光特性的情況下與 RNA 結合。為了區分 DNA 和 RNA，有必要使用足夠的核酸酶。
一種無需事先操作即可在 DNA 和 RNA 之間產生差異的染料是吖啶橙。它的最大激發/發射對在 DNA 結合狀態下為 502 nm/525 nm，在 RNA 結合狀態下變為 460 nm/650 nm。此外，它可以進入酸性區室，如陽離子染料質子化的溶酶體。在這種酸性環境中，吖啶橙被藍色光譜中的光激發，而橙色區域的發射最強。它通常用于識別凋亡細胞，因為它們有很多被吞噬的酸性隔間

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區室和細胞器特異性染料
有許多特定的染料可用于研究細胞區室，例如溶酶體、內體或細胞器，例如線粒體。
一種眾所周知的觀察線粒體的方法是使用 MitoTracker®。這是一種細胞滲透性染料，具有溫和的硫醇反應性氯甲基部分，用于通過與半胱氨酸殘基的游離硫醇基團反應共價結合基質蛋白。 MitoTracker® 以不同的顏色和修飾形式存在（見表 1）。與羅丹明 123 或四甲基玫瑰胺等常規線粒體特異性染色劑相比，MitoTracker® 在用固定劑破壞膜電位后不會被洗掉。
LysoTracker 是一組不同顏色的染料，用于染色溶酶體等酸性隔室。這些是與熒光團連接的可滲透膜的弱堿基。由于質子化，這些堿很可能對酸性區室具有親和力（見表 1）。
與溶酶體相當的隔室是釀酒酵母等真菌中的液泡。這種膜封閉空間也是酸性的。在熒光顯微鏡中觀察它的一種方法是使用苯乙烯基染料，如 FM 4-64® 或 FM 5-95®。
在研究蛋白質分泌時，內質網 (ER) 通常會被染色。一種經典的染色該隔室的染料是 DiOC6(3)，它對 ER 有偏好，但仍與線粒體等其他膜結合。另一種專門染色 ER 的方法是使用 ER-Tracker，例如 ER-Tracker Green 和 ER-Tracker Red。兩者都是基于 BODIPY 的染料，它們與格列本脲（一種磺酰脲酶）相連，它與僅駐留在 ER 膜中的 ATP 敏感鉀通道結合。 BODIPY（硼-二吡咯亞甲基）描述了一組幾乎不溶于水的相對 pH 不敏感的染料。這使它們成為脂質和膜標記的非常好的工具。

4. 浦肯野細胞，小鼠小腦皮質的三重標記旁矢狀切面。 紅色：抗鈣結合蛋白-D28k/Cy3，綠色：抗 GFAP/Cy5，藍色：Hoechst 33258。
與 ER 相鄰的隔間 - 高爾基體 - 可以用熒光神經酰胺類似物標記，如 NBD C6-神經酰胺和 BODIPY FL C5-神經酰胺。 神經酰胺是高爾基體中高度富集的鞘脂。
借助其他基于脂質的染料，可以對特殊的膜區域（如脂質筏）進行染色。 這些富含膽固醇的結構域可以通過使用 NBD-6 膽固醇或 NBP-12 膽固醇等（Avanti Polar Lipids）來可視化。
還可以借助對細胞中不同位置的偏好的蛋白質對感興趣的區域進行染色。 一個例子是使用小麥胚芽凝集素 (WGA)，它與質膜中存在的唾液酸和 N-乙酰氨基葡糖特異性結合。

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離子成像
在神經元研究、基因活動或細胞運動的情況下，研究細胞的離子濃度是有意義的。鈉、鈣、氯或鎂離子對許多不同的細胞事件有深遠的影響。通常，離子可以在熒光標記的螯合劑的幫助下被捕獲，這些螯合劑在與適當的離子結合時會改變它們的光譜特性。標記螯合劑的一個例子是鈣指示劑 fura-2、indo-1、fluo-3、fluo-4 和 Calcium-Green。對于鈉檢測，通常使用 SBFI（鈉結合苯并呋喃間苯二甲酸酯）或鈉綠。 PBFI（鉀結合苯并呋喃間苯二甲酸酯）檢測鉀離子。

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功能分析
“功能測定”是一個廣義術語，用于涵蓋標準化實驗，以評估可以用熒光標記物可視化的各種功能。這些標記可以包括但不限于任何上述標記技術和熒光團。對于許多這些功能性分析，染色試劑盒是市售的，可以很容易地應用于各種各樣的樣品。功能測定的一個例子是眾所周知的和廣泛使用的活死測定。兩個熒光團用于標記活細胞和死細胞。掌握這兩個值，就可以評估細胞的整體健康狀況。將此信息與其他標記相關聯甚至可以增加對基本過程的理解。

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熒光染料及其激發和發射波長
下表顯示了熒光染料的完整列表及其各自的激發和發射波長峰值。請注意，除了這些峰之外，每種染料都具有不同的激發和發射光譜。在一個實驗中選擇幾種染料組合使用時，研究人員應注意由于串擾（或滲漏）導致的重疊激發和發射光譜，這可能導致假陰性或陽性，或以其他方式模糊數據。另一個可以扭曲熒光成像的來源是細胞和組織中天然存在的熒光蛋白產生的自發熒光，這在植物或藻類的實驗中尤其需要考慮。充分了解樣品中所用染料的光譜對于選擇合適的激發光源（例如 LED、弧光燈、激光線）以及合適的發??射濾光片和檢測器也很重要。

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6.Alexa 488（綠色曲線）和Alexa 555（黃色曲線）的熒光發射曲線。 兩個發射光譜的重疊是顯而易見的。 紅線表示 488 發射濾波器的帶通。

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表1-熒光染料

熒光染料產品	Excitation	Emission
Indo-1, Ca saturated	331 nm	404 nm
Indo-1 Ca2+	346 nm	404 nm
Cascade Blue BSA pH 7.0	401 nm	419 nm
Cascade Blue	398 nm	420 nm
LysoTracker Blue	373 nm	421 nm
Alexa 405	401 nm	421 nm
LysoSensor Blue pH 5.0	374 nm	424 nm
LysoSensor Blue	374 nm	424 nm
DyLight 405	399 nm	434 nm
DyLight 350	332 nm	435 nm
BFP (Blue Fluorescent Protein)	380 nm	439 nm
Alexa 350	343 nm	441 nm
7-Amino-4-methylcoumarin pH 7.0	346 nm	442 nm
Amino Coumarin	345 nm	442 nm
AMCA conjugate	347 nm	444 nm
Coumarin	360 nm	447 nm
7-Hydroxy-4-methylcoumarin	360 nm	447 nm
7-Hydroxy-4-methylcoumarin pH 9.0	361 nm	448 nm
6,8-Difluoro-7-hydroxy-4-methylcoumarin pH 9.0	358 nm	450 nm
Hoechst 33342	352 nm	455 nm
Pacific Blue	404 nm	455 nm
Hoechst 33258	352 nm	455 nm
Hoechst 33258-DNA	352 nm	455 nm
Pacific Blue antibody conjugate pH 8.0	404 nm	455 nm
PO-PRO-1	434 nm	457 nm
PO-PRO-1-DNA	435 nm	457 nm
POPO-1	433 nm	457 nm
POPO-1-DNA	433 nm	458 nm
DAPI-DNA	359 nm	461 nm
DAPI	358 nm	463 nm
Marina Blue	362 nm	464 nm
SYTOX Blue-DNA	445 nm	470 nm
CFP (Cyan Fluorescent Protein)	434 nm	474 nm
eCFP (Enhanced Cyan Fluorescent Protein)	437 nm	476 nm
1-Anilinonaphthalene-8-sulfonic acid (1,8-ANS)	375 nm	479 nm
Indo-1, Ca free	346 nm	479 nm
1,8-ANS (1-Anilinonaphthalene-8-sulfonic acid)	375 nm	480 nm
BO-PRO-1-DNA	462 nm	482 nm
BOPRO-1	462 nm	482 nm
BOBO-1-DNA	461 nm	484 nm
SYTO 45-DNA	451 nm	486 nm
evoglow-Pp1	448 nm	495 nm
evoglow-Bs1	448 nm	496 nm
evoglow-Bs2	448 nm	496 nm
Auramine O	431 nm	501 nm
DiO	487 nm	501 nm
LysoSensor Green pH 5.0	447 nm	502 nm
Cy 2	489 nm	503 nm
LysoSensor Green	447 nm	504 nm
Fura-2, high Ca	336 nm	504 nm
Fura-2 Ca2+sup>	336 nm	505 nm
SYTO 13-DNA	488 nm	506 nm
YO-PRO-1-DNA	491 nm	507 nm
YOYO-1-DNA	491 nm	509 nm
eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein)	488 nm	509 nm
LysoTracker Green	503 nm	509 nm
GFP聽(S65T)	489 nm	509 nm
BODIPY FL, MeOH	502 nm	511 nm
Sapphire	396 nm	511 nm
BODIPY FL conjugate	503 nm	512 nm
MitoTracker Green	490 nm	512 nm
MitoTracker Green FM, MeOH	490 nm	512 nm
Fluorescein 0.1 M NaOH	493 nm	513 nm
Calcein pH 9.0	494 nm	514 nm
Fluorescein pH 9.0	490 nm	514 nm
Calcein	493 nm	514 nm
Fura-2, no Ca	367 nm	515 nm
Fluo-4	494 nm	516 nm
FDA	495 nm	517 nm
DTAF	495 nm	517 nm
Fluorescein	495 nm	517 nm
Fluorescein antibody conjugate pH 8.0	493 nm	517 nm
CFDA	495 nm	517 nm
FITC	495 nm	517 nm
Alexa Fluor 488 hydrazide-water	493 nm	518 nm
DyLight 488	493 nm	518 nm
5-FAM pH 9.0	492 nm	518 nm
FITC聽antibody conjugate pH 8.0	495 nm	519 nm
Alexa 488	493 nm	520 nm
Rhodamine 110	497 nm	520 nm
Rhodamine 110 pH 7.0	497 nm	520 nm
Acridine Orange	431 nm	520 nm
Alexa Fluor 488 antibody conjugate pH 8.0	499 nm	520 nm
BCECF pH 5.5	485 nm	521 nm
PicoGreendsDNA quantitation reagent	502 nm	522 nm
SYBR Green I	498 nm	522 nm
Rhodaminen Green pH 7.0	497 nm	523 nm
CyQUANT GR-DNA	502 nm	523 nm
NeuroTrace 500/525, green fluorescent Nissl stain-RNA	497 nm	524 nm
DansylCadaverine	335 nm	524 nm
Rhodol Green antibody conjugate pH 8.0	499 nm	524 nm
Fluoro-Emerald	495 nm	524 nm
Nissl	497 nm	524 nm
Fluorescein dextran pH 8.0	501 nm	524 nm
Rhodamine Green	497 nm	524 nm
5-(and-6)-Carboxy-2', 7'-dichlorofluorescein pH 9.0	504 nm	525 nm
DansylCadaverine, MeOH	335 nm	526 nm
eYFP (Enhanced Yellow Fluorescent Protein)	514 nm	526 nm
Oregon Green 488	498 nm	526 nm
Oregon Green 488 antibody conjugate pH 8.0	498 nm	526 nm
Fluo-3	506 nm	527 nm
BCECF pH 9.0	501 nm	527 nm
SBFI-Na+	336 nm	527 nm
Fluo-3 Ca2+	506 nm	527 nm
Rhodamine 123, MeOH	507 nm	529 nm
FlAsH	509 nm	529 nm
Calcium Green-1 Ca2+	506 nm	529 nm
Magnesium Green	507 nm	530 nm
DM-NERF pH 4.0	493 nm	530 nm
Calcium Green	506 nm	530 nm
Citrine	515 nm	530 nm
LysoSensor Yellow pH 9.0	335 nm	530 nm
TO-PRO-1-DNA	515 nm	531 nm
Magnesium Green Mg2+	507 nm	531 nm
Sodium Green Na+	507 nm	531 nm
TOTO-1-DNA	514 nm	531 nm
Oregon Green 514	512 nm	532 nm
Oregon Green 514 antibody conjugate pH 8.0	513 nm	533 nm
NBD-X	466 nm	534 nm
DM-NERF pH 7.0	509 nm	537 nm
NBD-X, MeOH	467 nm	538 nm
CI-NERF pH 6.0	513 nm	538 nm
Alexa 430	431 nm	540 nm
Alexa Fluor 430 antibody conjugate pH 7.2	431 nm	540 nm
CI-NERF pH 2.5	504 nm	541 nm
Lucifer Yellow, CH	428 nm	542 nm
LysoSensor Yellow pH 3.0	389 nm	542 nm
6-TET, SE pH 9.0	521 nm	542 nm
Eosin antibody conjugate pH 8.0	525 nm	546 nm
Eosin	524 nm	546 nm
6-Carboxyrhodamine 6G pH 7.0	526 nm	547 nm
6-Carboxyrhodamine 6G, hydrochloride	525 nm	547 nm
Bodipy R6G SE	528 nm	547 nm
BODIPY R6G, MeOH	528 nm	547 nm
6 JOE	520 nm	548 nm
Cascade Yellow antibody conjugate pH 8.0	399 nm	549 nm
Cascade Yellow	399 nm	549 nm
mBanana	540 nm	553 nm
Alexa Fluor 532 antibody conjugate pH 7.2	528 nm	553 nm
Alexa 532	528 nm	553 nm
Erythrosin-5-isothiocyanate pH 9.0	533 nm	554 nm
6-HEX, SE pH 9.0	534 nm	559 nm
mOrange	548 nm	562 nm
mHoneydew	478 nm	562 nm
Cy 3	549 nm	562 nm
Rhodamine B	543 nm	565 nm
DiI	551 nm	565 nm
5-TAMRA-MeOH	543 nm	567 nm
Alexa 555	553 nm	568 nm
Alexa Fluor 555 antibody conjugate pH 7.2	553 nm	568 nm
DyLight 549	555 nm	569 nm
BODIPY TMR-X, SE	544 nm	570 nm
BODIPY TMR-X, MeOH	544 nm	570 nm
PO-PRO-3-DNA	539 nm	571 nm
PO-PRO-3	539 nm	571 nm
Rhodamine	551 nm	573 nm
Bodipy TMR-X conjugate	544 nm	573 nm
POPO-3	533 nm	573 nm
Alexa 546	562 nm	573 nm
BODIPY TMR-X antibody conjugate pH 7.2	544 nm	573 nm
Calcium Orange Ca2+	549 nm	573 nm
TRITC	550 nm	573 nm
Calcium Orange	549 nm	574 nm
Rhodaminephalloidin pH 7.0	558 nm	575 nm
MitoTracker Orange	551 nm	575 nm
MitoTracker Orange, MeOH	551 nm	575 nm
Phycoerythrin	565 nm	575 nm
Magnesium Orange	550 nm	575 nm
R-Phycoerythrin pH 7.5	565 nm	576 nm
5-TAMRA pH 7.0	553 nm	576 nm
5-TAMRA	549 nm	577 nm
Rhod-2	552 nm	577 nm
FM 1-43	472 nm	578 nm
Rhod-2 Ca2+	553 nm	578 nm
Tetramethylrhodamine antibody conjugate pH 8.0	552 nm	578 nm
FM 1-43 lipid	473 nm	579 nm
LOLO-1-DNA	568 nm	580 nm
dTomato	554 nm	581 nm
DsRed	563 nm	581 nm
Dapoxyl (2-aminoethyl) sulfonamide	372 nm	582 nm
Tetramethylrhodamine dextran pH 7.0	555 nm	582 nm
Fluor-Ruby	554 nm	582 nm
Resorufin	571 nm	584 nm
Resorufin pH 9.0	571 nm	584 nm
mTangerine	568 nm	585 nm
LysoTracker Red	578 nm	589 nm
Lissaminerhodamine	572 nm	590 nm
Cy 3.5	578 nm	591 nm
Rhodamine Red-X antibody conjugate pH 8.0	573 nm	591 nm
Sulforhodamine 101, EtOH	578 nm	593 nm
JC-1 pH 8.2	593 nm	595 nm
JC-1	592 nm	595 nm
mStrawberry	575 nm	596 nm
MitoTracker Red	578 nm	599 nm
MitoTracker Red, MeOH	578 nm	599 nm
X-Rhod-1 Ca2+	580 nm	602 nm
Alexa Fluor 568 antibody conjugate pH 7.2	579 nm	603 nm
Alexa 568	576 nm	603 nm
5-ROX pH 7.0	578 nm	604 nm
5-ROX (5-Carboxy-X-rhodamine, triethylammonium salt)	578 nm	604 nm
BO-PRO-3-DNA	574 nm	604 nm
BOPRO-3	574 nm	604 nm
BOBO-3-DNA	570 nm	605 nm
Ethidium Bromide	524 nm	605 nm
ReAsH	597 nm	608 nm
Calcium Crimson	589 nm	608 nm
Calcium Crimson Ca2+	590 nm	608 nm
mRFP	585 nm	608 nm
mCherry	587 nm	610 nm
Texas Red-X antibody conjugate pH 7.2	596 nm	613 nm
HcRed	590 nm	614 nm
DyLight 594	592 nm	616 nm
Ethidium homodimer-1-DNA	528 nm	617 nm
Ethidiumhomodimer	528 nm	617 nm
Propidium Iodide	538 nm	617 nm
SYPRO Ruby	467 nm	618 nm
Propidium Iodide-DNA	538 nm	619 nm
Alexa 594	590 nm	619 nm
BODIPY TR-X, SE	588 nm	621 nm
BODIPY TR-X, MeOH	588 nm	621 nm
BODIPY TR-X phallacidin pH 7.0	590 nm	621 nm
Alexa Fluor 610 R-phycoerythrin streptavidin pH 7.2	567 nm	627 nm
YO-PRO-3-DNA	613 nm	629 nm
Di-8 ANEPPS	469 nm	630 nm
Di-8-ANEPPS-lipid	469 nm	631 nm
YOYO-3-DNA	612 nm	631 nm
Nile Red-lipid	553 nm	636 nm
Nile Red	559 nm	637 nm
DyLight 633	624 nm	646 nm
mPlum	587 nm	649 nm
TO-PRO-3-DNA	642 nm	657 nm
DDAO pH 9.0	648 nm	657 nm
Fura Red, high Ca	434 nm	659 nm
Allophycocyanin pH 7.5	651 nm	660 nm
APC (allophycocyanin)	650 nm	660 nm
Nile Blue, EtOH	631 nm	660 nm
TOTO-3-DNA	642 nm	661 nm
Cy 5	646 nm	664 nm
BODIPY 650/665-X, MeOH	646 nm	664 nm
Alexa Fluor 647 R-phycoerythrin streptavidin pH 7.2	569 nm	666 nm
DyLight 649	652 nm	668 nm
Alexa Fluor 647 antibody conjugate pH 7.2	653 nm	668 nm
Alexa 647	653 nm	669 nm
Fura Red Ca2+	435 nm	670 nm
Atto 647	644 nm	670 nm
Fura Red, low Ca	472 nm	673 nm
Carboxynaphthofluorescein pH 10.0	600 nm	674 nm
Alexa 660	664 nm	691 nm
Alexa Fluor 660 antibody conjugate pH 7.2	663 nm	691 nm
Cy 5.5	673 nm	692 nm
Alexa Fluor 680 antibody conjugate pH 7.2	679 nm	702 nm
Alexa 680	679 nm	703 nm
DyLight 680	678 nm	706 nm
Alexa Fluor 700 antibody conjugate pH 7.2	696 nm	719 nm
Alexa 700	696 nm	720 nm
FM 4-64, 2% CHAPS	506 nm	751 nm
FM 4-64	508 nm	751 nm

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